Наши посетители

Flag Counter

Карта посещений

Просмотров: 847

А.В. Зверев1, к.б.н. О.Е. Клементьева2, М.В. Жукова2, А.С. Красноперова2
1 Завод «Медрадиопрепарат» – филиал ФГУП «Федеральный центр по проектированию и развитию объектов ядерной медицины» ФМБА России, Москва
2 ФГБУ «ГНЦ «Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна»
ФМБА России, Москва

РЕЗЮМЕ
Ревматоидное поражение суставов зачастую сопровождается болями, ограничением подвижности и ведет к посте-
пенному разрушению сустава. Методом выбора в лечении этого заболевания в настоящее время признается радио-
нуклидная терапия суставов (радиосиновэктомия).
Материал и методы: исследование выполнено на крысах линии Wistar и кроликах породы шиншилла, которым было
проведено моделирование острого асептического синовита коленного сустава. Для выполнения процедуры радиоси-
новэктомии внутрисуставно вводили суспензию на основе микросфер альбумина 5–10 мкм, меченных рением-188
(МСА 5–10 мкм, 188Re).
Результаты исследования: данные, полученные при исследованиях крыс, демонстрируют достоверные различия в зна-
чениях, полученных для правой задней лапы у животных с моделью патологии, и контрольных животных, а также
между группами леченных и нелеченных животных. Отмечается увеличение доли опорной функции пораженной ко-
нечности у животных, получавших лечение радиофармпрепаратом, до результатов, достоверно не отличающихся
от контрольных цифр на 7-е сут наблюдения. В первые 2 сут уровень боли у леченных и нелеченных кроликов был
одинаковым, наблюдалась хромота опорного типа, практически отсутствовала опора на больную лапу. На 4-е сут
при пальпации и сгибании конечности кролики, которым внутрисуставно вводили препарат, не выказывали боле-
вой реакции. Хромота опорного типа была практически не выражена. На 7-е сут у кроликов, получавших лечение,
при пальпации не отмечалось ни хромоты, ни признаков болезненности.
Выводы: исследования терапевтического потенциала МСА 5–10 мкм, 188Re, выполненные на двух видах лабораторных
животных с острым асептическим синовитом коленного сустава, показали эффективность его внутрисуставного
введения по критериям снижения болевой чувствительности пораженной конечности у крыс и положительной дина-
мики восстановления двигательной активности у кроликов.
Ключевые слова: сустав, воспаление, радиосиновэктомия, радиофармацевтический препарат, рений-188.
Для цитирования: Зверев А.В., Клементьева О.Е., Жукова М.В., Красноперова А.С. Доклиническая оценка терапевти-
ческого потенциала радиофармацевтического лекарственного препарата на основе микросфер альбумина 5–10 мкм
с рением-188 // РМЖ. 2018. № 10. С. 1–№.

ABSTRACT
Preclinical evaluation of the therapeutic potential of a radiopharmaceutical drug based on 5-10 micron albumin microspheres
with rhenium-188
Zverev A.V.1, Klementieva O.E.2, Zhukova M.V.2, Krasnoperova A.S.2
1 Plant “Medradiopreparat”, a branch of the “Federal Center for Design and Development of Nuclear Medicine Facilities” of
FMBA of Russia, Moscow
2 Federal Medical Biophysical Center named after A.I. Burnazyan of FMBA of Russia, Moscow
The rheumatoid disease of joints is often accompanied by pain, limited mobility and leads to a gradual destruction of the joint.
Currently, the method of choice in the treatment of this disease is a radionuclide therapy of joints (radiosynovectomy).
Patients and Methods: the study was performed on Wistar rats and chinchilla rabbits, in which an acute aseptic synovitis of
the knee joint was simulated. A suspension based on 5-10 micron albumin microspheres labeled with rhenium-188 (MCA 5–10
micron, 188Re) was intraarticularly introduced to perform the radiosynovectomy.
Results: the data obtained in the studies of rats show significant differences in the values obtained for the right hind paw in
animals with a model of pathology and control animals, as well as between groups of treated and untreated animals. There is
an increase in the proportion of the supporting function of the affected limb in animals treated with a radiopharmaceutical to
the results that are not significantly different from the control figures on the seventh day of observation. In the first two days
the level of pain in the treated and untreated rabbits was the same, lameness of the supporting type was observed, there was practically no support for the diseased paw. On the fourth day, the rabbits, which recieved the intraarticularly injected drug,
did not show a pain reaction during palpation and flexion of the limb. Lameness of the supporting type was practically not
expressed. On the seventh day, the treated rabbits did not have lameness or signs of pain during palpation.
Conclusions: studies of the therapeutic potential of MCA 5–10 micron, 188Re performed on two types of laboratory animals
with acute aseptic synovitis of the knee joint showed the effectiveness of its intraarticular administration according to the
criteria for reducing the pain sensitivity of the affected limb in rats and the positive dynamics of restoring motor activity in
rabbits.
Key words: joint, inflammation, radiosynovectomy, radiopharmaceutical, rhenium-188.
For citation: Zverev A.V., Klementieva O.E., Zhukova M.V., Krasnoperova A.S. Preclinical evaluation of the therapeutic potential
of a radiopharmaceutical drug based on 5-10 micron albumin microspheres with rhenium-188 // RMJ. 2018. № 10. P. 2–№.

Введение
Основными заболеваниями, связанными с гипертро-
фией (увеличением объема и массы) синовиальных клеток
являются синовит, ревматоидный артрит, гемофилический
артрит и, в некоторых случаях, травматическое заболева-
ние сустава [1, 2]. Воспаление приводит к росту числа ма-
крофагов, увеличению продукции синовиальной жидкости,
избыточному высвобождению активных молекул, усилива-
ющих воспаление и создающих так называемый порочный
круг. Эти изменения сопровождаются болями, ограниче-
нием подвижности и ведут к постепенному разрушению
сустава [3]. На поздних стадиях в патогенезе суставных па-
тологий преобладают процессы, обусловленные соматиче-
ской мутацией синовиальных фибробластов и дефектами
апоптоза. Вследствие этого клетки-мишени начинают те-
рять способность отвечать на регулирующие противовос-
палительные стимулы и приобретают устойчивость к фар-
макологическим воздействиям. Поэтому обычные методы
лечения – фармакологическая терапия и хирургическая
операция – часто не позволяют справиться с болезнью,
и существует высокая вероятность рецидива спустя 3–5
лет [2]. Поэтому в настоящее время в мире радионуклид-
ная терапия суставов (радиосиновэктомия) признается ме-
тодом выбора в лечении ревматоидного поражения суста-
вов. Данный метод лечения по эффективности сопоставим
с хирургическим (72,6% и 75,2% положительных результа-
тов соответственно). Основными достоинствами радиоси-
новэктомии являются ее минимальная травматичность, от-
носительная простота исполнения, не требующая сложных
и длительных послеоперационных реабилитационных ме-
роприятий. Также следует отметить, что хрящевая ткань от-
носительно радиационно устойчива, поэтому радиоактив-
ное вещество с эффективным проникающим воздействием
сквозь мягкие ткани можно вводить непосредственно в су-
став, не оказывая вредного воздействия на здоровые тка-
ни, его окружающие. Все вышеперечисленное позволяет
характеризовать процедуру радиосиновэктомии как пер-
спективную альтернативу обычным методам лечения вос-
палительных заболеваний суставов [2, 4, 5].
Существуют требования к радиофармпрепаратам, ис-
пользующимся для радиосиновэктомии. Размеры мечен-
ной частицы должны быть достаточно малы (2–10 мкм),
чтобы частица могла быть фагоцитирована макрофагами,
но не настолько малы (<2 мкм), чтобы способствовать быстрому
биологическому выведению из сустава, приводящему
за счет диффузии к «утечке» радионуклида из пораженного
сустава в организм в течение первых 12 ч [6].
Для целей радиосиновэктомии используются бета-из-
лучающие радиоизотопы. При попадании в полость су-
става радионуклиды в форме коллоидов распознаются
иммунной системой организма в качестве инородных тел
и фагоцитируются внешним клеточным слоем синовиаль-
ной оболочки. Вследствие селективного облучения сино-
виальной оболочки происходят некроз клеток и умень-
шение воспаления. Артроскопическое исследование
показывает сокращение числа и размера синовиальных
ворсинок, а также уменьшение переполненности кровью
сосудов оболочки [7]. Далее происходит прогрессирую-
щее уплотнение соединительной ткани синовиальной обо-
лочки, сосудов и редко – повреждение костей сустава [8].

Рис. 1. Внешний вид процедуры исследования на приборе «Тест инвалидности»

Без имени-1

Через несколько месяцев отмечается полное предотвращение скопления мо-
ноцитов и лимфоцитов в синовиальной оболочке [9]. Дальнейшее разрушение
полости сустава не происходит. После замены фиброзной ткани синовиальная
оболочка не реагирует на иммунологическую стимуляцию, достигается от-
сутствие рецидива воспалительного процесса и длительный срок ремиссии.
Радиосиновэктомия
– это утвердившийся метод лечения воспалительных забо-
леваний суставов, широко применяющийся в мире [12]. К сожалению, в настоя-
щее время в России не производятся и не ввозятся импортные радиофармацев-
тические препараты для радиосиновэктомии, что негативным образом влияет
на возможности оказания медицинской помощи многим пациентам.
Появление на отечественном рынке генератора 188W/188Re, который мо-
жет быть установлен непосредственно в терапевтическом отделении медицин-
ского учреждения и эксплуатироваться в течение нескольких месяцев, диктует
возможность его использования для разработки нового радиофармпрепарата
для радиосинвэктомии. Период полураспада рения-188 составляет 16,9 ч, сред-
няя энергия испускаемых β-частиц – 776 кэВ (Еmax = 2,11 МэВ, 79%). Средняя
длина пробега частиц в ткани составляет 3,8 мм, максимальное проникнове-
ние радионуклида – 11 мм. Это позволяет проводить радиосиновэктомию суста-
вов средних и крупных размеров, таких как голеностопный, коленный, локтевой
или тазобедренный [10]. Рений-188 распадается до осмия-188 с испусканием
γ-квантов с энергией 155 кэВ (15%), что дает возможность визуализировать лока-
лизацию введенного радиофармпрепарата методом однофотонной эмиссионной
компьютерной томографии (ОФЭКТ), оценивать накопление в ткани и рассчиты-
вать поглощенную дозу, а также проводить дозиметрическое планирование [11].

Материал и методы
Исследуемый радиофармацевтический лекарственный препарат (РФЛП)
представляет собой суспензию на основе микросфер альбумина 5–10 мкм, ме-
ченных рением-188 (МСА 5–10 мкм, 188Re) для внутрисуставного введения с це-
лью выполнения процедуры радиосиновэктомии. Для приготовления препарата
необходимо получить радиоактивный рений-188 путем элюирования из генера-
тора или заказать активную фармацевтическую субстанцию, производимую про-
мышленным способом. Другой, «холодной» частью препарата является набор ре-
агентов, состоящий из трех флаконов с лиофильно высушенным содержимым.
Получение препарата происходит при последовательном перемешивании радио-
активного рения-188 с микросферами альбумина и добавлением вспомогательных
веществ. Основным параметром качественного связывания рения-188 и микросфер
альбумина является нагревание реакционной смеси при 100° C. Весь процесс
занимает не более 2 ч, и стерильный препарат готов для применения.
Изучение терапевтического потенциала выполнено на самках крыс линии
Wistar и кроликов породы шиншилла. Исследования выполнены на животных
с моделью острой воспалительной патологии суставов, а именно острым асепти-
ческим синовитом коленного сустава. Методика моделирования суставной па-
тологии заключается во введении в полость коленного сустава раздражающего
вещества, которое нарушает процессы синтеза/резорбции тканей сустава и при-
водит к выраженным воспалительно-деструктивным изменениям в суставе и па-
раартикулярных тканях. В данном исследовании был использован метод, предло-
женный В.М. Коваленко с соавт. [13]. В качестве ирританта применялся витамин
А в виде 3,44%-ного масляного раствора ретинола ацетата (1 мг ретинола ацетата
соответствует 2907 МЕ витамина А) из расчета 8,0–8,5 мг на 1 кг массы тела кро-
лика и 13,5–13,9 мг на 1 кг массы тела крысы. Процесс развития патологии зани-
мал в среднем 7 дней и контролировался ежедневной пальпацией сустава и ви-
зуальной оценкой опорной функции пораженной конечности. Для выполнения
исследований терапевтического потенциала РФЛП крысам в сустав с модельной
патологией вводили 0,05 мл препарата с объемной активностью 70,8 МБк/мл,
дозировка для кроликов составила 0,1 мл препарата с объемной активностью
192,0 МБк/мл, т. е. 3,6 и 19,2 МБк на животное соответственно. Критерием тера-
певтической эффективности являлось уменьшение болевого синдрома. Степень
выраженности болевого синдрома у крыс оценивали с помощью прибора «Тест
инвалидности» (Panlab Harvard Apparatus, Испания) (рис. 1). Этот тест является
основным для изучения болевой чувствительности у грызунов при отсутствии
внешнего болевого стимула, например, при воспалении или повреждении нервов одной из задних лап. Тестер инвалидности имеет два датчика веса и позволяет дать количественную оценку спонтанных изменений положения тела животного, отражающих
степень испытываемой боли, путем измерения веса, который животное переносит на каждую из задних лап.

Рис. 2. Динамика изменения значения индекса действия
РФЛП МСА 5–10 мкм, 188Re у крыс

01Таблица 1. Дистанция свободной пробежки животных
и кратность пробежек за 30 минут наблюдения
02Всех крыс, включенных в эксперимент, в течение 1 нед.,
предшествовавшей моделированию патологии, подвер-
гали тренировке. Для этого ежедневно каждое животное
помещали в прибор на 5–10 мин. Данная манипуляция вы-
полнялась с целью минимизации вероятности получения
артефактных результатов, вызванной повышенной тревож-
ностью животного, оказавшегося в непривычной для него
обстановке.
Измерение проводили в режиме реального времени
в течение 10 с, после чего оно автоматически останавли-
валось. Во время проведения исследования на дисплее
устройства выдаются графики, отображающие величи-
ну приложенного веса для каждого датчика. Устройство
вычисляет средний вес, приложенный на левый и правый
датчики в течение выбранного периода измерения. После
этого данные с устройства передаются в компьютер в виде
числовых значений.
По результатам измерений рассчитывали индекс дей-
ствия (ИД) РФЛП, значение которого отражает долю уча-
стия пораженной конечности в реализации опорной функ-
ции по формуле:
03
где:
Ппр – показатель (средний вес, приложенный на датчики
прибора, г) правой лапы с моделью патологии;
Плев – показатель (средний вес, приложенный на датчики
прибора, г) левой лапы, интактной у всех групп животных.
Степень выраженности болевого синдрома у кроли-
ков определяли по результатам исследования свободной
пробежки с наблюдением двигательной активности, ин-
тенсивности движений конечностью с воспаленным суставом,
пробегаемой дистанции на протяжении 7 дней
после введения препарата. Исследование двигательной
активности выполняли путем наблюдения за свободны-
ми передвижениями животных на протяжении 30 мин.
За этот период времени регистрировали количество про-
бежек (серий непрерывных прыжков) и дистанцию, прео-
доленную за каждую пробежку, с дискретностью 0,05 м.
Также ежедневно проводили пальпацию области воспа-
ления с наблюдением за ответной реакцией животного.
Наблюдение за животными осуществляли на протяжении
7 дней после инъекции (кроме 5-го дня, который прихо-
дился на воскресенье), что соответствует ~10 периодам
полураспада радионуклида.

Результаты
Данные, полученные при исследованиях крыс, демон-
стрируют достоверные различия в значениях, полученных
для правой задней лапы у животных с моделью патологии
и контрольных животных, а также между группами лечен-
ных и нелеченных животных (рис. 2). Отметим, что в нор-
ме животное опирается на обе конечности с примерно
одинаковой силой, т. е. значение ИД у здорового животного
должно быть примерно равно 0,50.
Полученные результаты наглядно демонстрируют увели-
чение доли опорной функции пораженной конечности у жи-
вотных, получавших лечение РФЛП, от практически полного
отказа от пользования лапой до введения РФЛП до резуль-
татов, достоверно не отличающихся от контрольных цифр
на 7-е сут наблюдения. В группе нелеченных животных на-
рушенная функция полностью не восстанавливалась.
Изучение терапевтического действия РФЛП у кроли-
ков также показало достоверный эффект обезболива-
ния. В течение 7 дней после введения РФЛП у животных
пальпаторно оценивали степень выраженности боле-
вой реакции и интенсивность хромоты. В первые 2 сут
уровень боли у леченных и нелеченных кроликов был
одинаковым, наблюдалась хромота опорного типа с ярко
выраженным укорочением шага в заднем отрезке и прак-
тически отсутствующей опорой на больную лапу. На 4-е
сут при пальпации и сгибании тазовой конечности в ко-
ленном суставе кролики, которым внутрисуставно вво-
дили препарат, не выказывали болевой реакции. Хромота
опорного типа была практически не выражена, живот-
ные практически полноценно опирались на пораженную
конечность. Кролики, не получавшие лечения, выдавали сильную болевую реакцию на пальпацию пораженного су-
става, опоры на больную конечность практически не было,
шаг в заднем отрезке был укорочен. На 7-е сут у кроликов,
получавших лечение, при пальпации не отмечалось при-
знаков болезненности вообще, хромота также не отмеча-
лась. У кроликов, не получавших лечение, болевая реак-
ция при пальпаторном исследовании сустава продолжала
проявляться, хотя и с существенно меньшей интенсивно-
стью. Также животные начали использовать пораженную
конечность для осуществления опорной функции, однако
доля ее участия была существенно снижена, т. к. кролики
продолжали ее беречь. Обобщенная по группам характе-
ристика двигательной активности животных, отражающая
средние значения количества пробежек и пройденную
дистанцию, показана в таблице 1.
По результатам, изложенным в таблице 1, была вы-
числена средняя длина одной пробежки для животных
каждой группы. Полученные результаты отражены графи-
чески на рисунке 3.

Рис. 3. Динамика изменения средней длины пробежки
кроликов с моделью острого синовита после внутрисуставного
введения РФЛП

04Представленные данные наглядно демонстрируют про-
грессирующее улучшение двигательной активности ле-
ченных животных по сравнению с группой не получавших
лечения. Характерно увеличение не только количества
пробежек и преодолеваемой дистанции, но и длины одной
пробежки, что говорит о существенном улучшении само-
чувствия животных.

Выводы
Исследования терапевтического потенциала РФЛП
МСА 5–10 мкм, 188Re, выполненные на двух видах лабо-
раторных животных с острым асептическим синовитом
коленного сустава, показали эффективность его внутри-
суставного введения по критериям снижения болевой
чувствительности пораженной конечности у крыс и по-
ложительной динамики восстановления двигательной ак-
тивности у кроликов.

Литература
1. Chinol M., Vallabhajosula S., Goldsmith S.J. et al. Chemistry and biological behavior
of Samarium-153 and Rhenium-186-labeled hydroxyapatite particles: potential
radiopharmaceuticals for radiation synovectomy // J Nucl Med. 1993. Vol. 34(9). P.
1536–1542.

2. Shortkroff S., Sledge C.B. Radiation synovectomy. In Principles of Nuclear Medicine.
2nd edition/ Edited by Wagner H.N. Jr., Szabo Z., Buchanan J.W. Philadelphia: WB
Saunders Co, 1995. P. 1021–1028.
3. Liepe K., Крылов В.В. Радиосиновиортез в лечении воспалительных заболе-
ваний суставов // Научно-практическая ревматология. 2013. Т. 51(6). С. 714–720
[Liepe K., Krylov V.V. Radiosinoviortez v lechenii vospalitel’nykh zabolevaniy sustavov //
Nauchno-prakticheskaya revmatologiya. 2013. T. 51(6). S. 714–720 (in Russian)].
4. Harbert J.C. Radiocolloid therapy in joint disease In: Nuclear medicine therapy /
Edited by: Harbert J.C. New York: Thieme Medical, 1987. P. 169–186.
5. Doherty M. Potential rheumatologic applications of intra-articular radiocolloid
therapy // Geriatric Medicine Today. 1984. Vol. 3. P. 31–42.
6. Noble J., Jones A.G., Davies M.A. et al. Leakage of radioactive practice system from
synovial joint sudied with a gamma camera; its application to radiation synovectomy //
J Bone Joint Surg Am. 1983. Vol. 65(3). P. 381–389.
7. Wang S.J., Lin W.Y., Chen M.N. et al. Histologic study of effects of radiation
synovectomy with Rhenium-188 microsphere // Nucl Med Biol. 2001. Vol. 28(6)
P. 727–732.
8. Mohr W., Mohing W., Hersener J. Morphological changes in the articular capsule
tissue after preliminary synoviorthesis // Z Rheumatol. 1977. Vol. 36(9–10). Р. 316–331.
9. Menkes C.J. Gelenkverödung mittels radioaktiver Isotope bei rheumatoider
Arthritis // Therapiewoche. 1979. Vol. 29. P. 498–501.
10. Shamim S.A., Kumar R., Halanaik D. et al. Role of rhenium-188 tin colloid
radiosynovectomy in patients with inflammatory knee joint conditions refractory to
conventional therapy // Nucl Med Commun. 2010. Vol. 31(9). P. 814–820.
11. Kamaleshwaran K.K., Gounder T.S., Krishnan B. et al. Radiosynovectomy of ankle
joint synovitis in juvenile rheumatoid arthritis treated with rhenium-188 tin colloid and
imaging with SPECT/CT // Egypt Rheumatol Rehabil. 2015. Vol. 42. P. 159–161.
12. Clunie G., Fischer M.; EANM. EANM Procedure Guidelines for Radiosynovectomy //
Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003. Vol. 30(3). P. 12–16.
13. Коваленко В.М., Вікторов О.П., Корж М.О. и др. Спосіб моделювання остеоар-
трозу з синовіїтом / Патент 79206. Україна, МПК8 G 09 В 23/28, заявник і патентов-
ласник Інститут кардіології ім. акад. М.Д. Стражеска АМН України. № 200510418.
Заявл. 4.11.2005. Опубл. 25.05.2007. Бюл. № 7 [ Kovalenko V.M., Viktorov O.P., Korzh
M.O. y dr. Sposib modelyuvannya osteoartrozu z synoviyitom / Patent 79206. Ukrayina,
MPK8 G 09 V 23/28, zayavnyk i patentovlasnyk Instytut kardiolohiyi im. akad. M.D.
Strazheska AMN Ukrayiny. № 200510418. Zayavl. 4.11.2005. Opubl. 25.05.2007. Byul.
№ 7 (in Ukrainian)].

 

 

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Свежие записи

Учебник ревматологии
плечевой сустав

Сомали

Астрологический ревматологический прогноз на сентябрь2018